布魯氏菌病是一種亞急性或慢性的疾病,可造成多種動(dòng)物發(fā)病,本質(zhì)上是一種動(dòng)物疾病,特別是家畜易發(fā)病,由布魯氏菌屬的細(xì)菌引起發(fā)病,人類可作為宿主偶爾攜帶這類細(xì)菌。偏好與人畜共患病潛能特征有差異的細(xì)菌,主要為:羊布魯氏菌,豬布魯氏菌,流產(chǎn)布魯氏菌和犬布魯氏菌。
布魯氏菌檢測(cè)試劑盒利用實(shí)時(shí)熒光PCR原理,主要用于布魯氏菌的定性篩查檢測(cè)。檢測(cè)原理如下:
以基因工程表達(dá)布魯氏菌蛋白作檢測(cè)和捕獲抗原,采用“雙抗原夾心法”膠體金免疫技術(shù)設(shè)計(jì),標(biāo)記膠體金的抗原與樣本中特異性抗體形成復(fù)合物,復(fù)合物在NC膜爬行的過程中與被包被在檢測(cè)線上的抗原特異性結(jié)合而被固定和富集于檢測(cè)線,使檢測(cè)線顯紅色反應(yīng),以試劑檢測(cè)線顯色與否反應(yīng)來判斷樣品是否存在布魯氏菌抗體。
布魯氏菌檢測(cè)試劑盒操作步驟:
1.從試劑盒中分別取出熒光反應(yīng)液、陰性對(duì)照、陽性對(duì)照。
2.在室溫下溶解后,充分震蕩混勻,瞬時(shí)離心。
3.取出PCR八連管,放在PCR板上。
4.在PCR八連管內(nèi)分裝熒光反應(yīng)液,分別向多個(gè)PCR管中加入提取好的樣品核酸,其余兩個(gè)管內(nèi)分別加入陰性對(duì)照和陽性對(duì)照。完成后蓋上管蓋,并在右上角做好標(biāo)記。
5.將標(biāo)記好的PCR八連管放入儀器震蕩混勻后瞬時(shí)離心,取出后拿起觀察有無氣泡。
6.打開熒光定量PCR儀器,將PCR八連管放入卡槽中,蓋上儀器。
7.點(diǎn)擊實(shí)驗(yàn)程序,選擇新建實(shí)驗(yàn),點(diǎn)擊運(yùn)行程序,并按照PCR八連管標(biāo)記順序依次選擇孔位信息:待測(cè)樣本、陽性對(duì)照、陰性對(duì)照。
8.點(diǎn)擊開始按鈕,運(yùn)行實(shí)驗(yàn)。
9.實(shí)驗(yàn)完成后,在屏幕查看實(shí)驗(yàn)結(jié)果,點(diǎn)擊詳細(xì)數(shù)據(jù)可查看實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),進(jìn)行數(shù)據(jù)回顧。