羊ELISA試劑盒作用的基本原理:抗原或抗體能吸附到固相載體表面,并保持其免疫學(xué)活性;抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結(jié)合物,仍保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性;酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后,可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來判定是否有免疫反應(yīng)的存在,而且顏色反應(yīng)的深淺是與標本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例,因此,可以按底物顯色的程度顯示試驗結(jié)果。
羊ELISA試劑盒使用的一些技巧:
1.血清:室溫血液天然凝結(jié)10-20分鐘,離心20分鐘左右。細心搜集上清,保存過程中如呈現(xiàn)沉積,應(yīng)再次離心。
2.血漿:應(yīng)根據(jù)羊ELISA試劑盒的標本的要求挑選EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右,保存過程中如有沉積構(gòu)成,應(yīng)該再次離心。
3.尿液:用無菌管搜集,離心20分鐘左右。細心搜集上清,保存過程中如有沉積構(gòu)成,應(yīng)再次離心。
4.細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管搜集。離心20分鐘左右。細心搜集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS稀釋細胞懸液,細胞濃度到達100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細胞損壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右。細心搜集上清。保存過程中如有沉積構(gòu)成,應(yīng)再次離心。
5.安排標本:切開標本后,稱取分量。參加一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本消融后依然堅?-8℃的溫度。參加一定量的PBS,用手工或勻漿器將標本勻漿充沛。離心20分鐘左右。細心搜集上清。分裝后一份待檢測,其他冷凍備用。
6.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行試驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)防止反復(fù)凍融.